1、如果有N個(gè)樣品，標(biāo)記N+2個(gè)1.5-2mL螺旋蓋塑料離心管，多出的一個(gè)為陽(yáng)性對(duì)照，一個(gè)為陰性對(duì)照。為避免污染，建議不要使用壓蓋式塑料離心管。在每個(gè)管上做個(gè)標(biāo)記，以在后續(xù)操作時(shí)區(qū)別向心面和離心面。然后在離心管中分別加0.2mL液體樣品（血清、血漿、尿液、腦脊液、唾液、眼淚等），陽(yáng)性對(duì)照和陰性對(duì)照。

1.1、如果是口腔拭子、咽喉拭子等各種拭子樣品，則將拭子放入0.2mL自備生理鹽水中擠壓出液體，然后取0.2mL進(jìn)行提取。

1.2、如果是糞便等半固定樣品，則取約0.3mL的樣品，加入0.3mL自備生理鹽水。震蕩重懸，離心取0.2mL上清進(jìn)行提取。

1.3、如果血液，細(xì)胞培養(yǎng)液等含細(xì)胞的液體?？梢噪x心用上清，也可以直接取 用，但后者提取的病毒DNA中會(huì)有少量細(xì)胞的基因組DNA污染（但不影響PCR）。血漿的抗凝劑必須是EDTA或ACD，不能是肝素。使用ACD時(shí)由于所加入ACD會(huì)增加體積，樣品會(huì)被稀釋。得到的病毒滴度會(huì)比使用EDTA低15%左右。血漿按0.6mL/管的量分裝保存，以避免反復(fù)凍融。

1.4、如果樣品是實(shí)體組織或培養(yǎng)細(xì)胞，則需要在自備生理鹽水中勻漿后離心， 用0.2mL上清液（含病毒）進(jìn)行提取，但此種情況下后得到的病毒DNA不可避免的會(huì)含有少量基因組DNA污染（但不影響PCR檢測(cè)）。

1.5、如果液體樣品中的病毒需要富集，可以使用1.5mL上述方法得到的液體在4℃24000g冷凍離心60分鐘，移棄1.3mL、用剩下的0.2mL繼續(xù)操作。

2、加入0.6mLDNA 病毒裂解液到各離心管中，振蕩30秒混勻后室溫放置10分鐘裂解病毒。注意：DNA病毒裂解液在4℃放置后可能會(huì)產(chǎn)生沉淀，使用前必須放在 65℃水浴使沉淀溶解并充分搖勻后再取用。

3、加入0.8mL上柱結(jié)合液到離心管中，顛倒混勻后轉(zhuǎn)移一半的混合液（0.8mL） 到離心吸附柱中，室溫放置2分鐘。

4、12000rpm室溫離心1分鐘，棄收集管中的穿透液，把離心吸附柱放回到收集 管中。

5、將剩余的另外一半裂解液（0.8mL）轉(zhuǎn)移到離心吸附柱中，室溫放置2分鐘。

6、12000rpm 室溫離心1分鐘，棄收集管中的穿透液，把離心吸附柱放回到收集 管中。

7、加入0.7mL通用洗柱液到離心吸附柱中。12000rmp室溫離心1分鐘。棄收集管中的穿透液，把離心吸附柱放回到收集管中。

8、加入0.3mL通用洗柱液到離心吸附柱中。12000rmp室溫離心1分鐘。棄收集管中的穿透液，把離心吸附柱放回到收集管中。此為第二次洗滌，可以跳過。

9、12000rpm室溫離心1分鐘（干甩），棄含穿透液的離心管。

10、將干甩后的離心吸附柱套入到一個(gè)自備的RNase-free的1.5mL離心管中。在離心吸附柱的濾膜的中部加入30-100uL DNA洗脫液3.0，然后室溫放置2分鐘。

11、12000rpm室溫離心1分鐘，離心管中的溶液即為病毒DNA溶液。

12、DNA樣品可以直接用于PCR，也可放-20℃長(zhǎng)期保存。