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質(zhì)粒菌株產(chǎn)品操作說明

更新日期: 2021-07-12
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一、擴增流程
收到產(chǎn)品后,請先根據(jù)產(chǎn)品管壁標簽來判斷產(chǎn)品形式,并在擴增前準確查找該質(zhì)粒菌株的抗性、感受態(tài)和培養(yǎng)溫度。
1、質(zhì)粒干粉(常溫運輸,存于-20度,90天保質(zhì)期,請務必轉(zhuǎn)化挑單克隆培養(yǎng),不要直接使用和測序)
①收到質(zhì)粒干粉后請先5000rpm離心1min,再加入20μl ddH2O去離子水溶解質(zhì)粒;
②取1支100μl 感受態(tài)于冰上解凍10min,加入2μl質(zhì)粒,再冰浴30min后,42℃熱激60s,不要攪動,再冰浴2min;(從第二步開始均要在超凈工作臺中無菌操作)

③加入900μl無抗的LB液體培養(yǎng)基,180rpm震蕩37℃培養(yǎng)45min;
④6000rpm離心5min,僅留100μl上清液重懸細菌沉淀,并涂布至目標質(zhì)??剐缘腖B平板上;(可使用本平臺的平板涂布專用玻璃珠進行涂布,可以比傳統(tǒng)涂布方法獲得更多轉(zhuǎn)化子)
⑤將平板正向培養(yǎng)1h,再倒置37℃培養(yǎng)14h。如果要求是30度則培養(yǎng)20h;
(菌落過多則將質(zhì)粒稀釋后再轉(zhuǎn)化。沒有菌落則加入10μl質(zhì)粒轉(zhuǎn)化。另不要直接轉(zhuǎn)表達感受態(tài),要先轉(zhuǎn)克隆感受態(tài),重提質(zhì)粒后再導入表達感受態(tài))

⑥挑取單菌落至LB液體培養(yǎng)基中,加入對應抗生素,220rpm震蕩培養(yǎng)14h,根據(jù)實驗需要和質(zhì)粒提取試劑盒說明書提取質(zhì)粒。
2、甘油菌種(冰袋運輸,存于-80℃,保質(zhì)期90天,請務必劃線挑單克隆培養(yǎng))
四區(qū)劃線后挑單菌落培養(yǎng),酵母菌需要先液體復蘇再四區(qū)劃線,再挑單菌落液體培養(yǎng)。
3、穿刺菌種(冰袋運輸,存于4℃,保質(zhì)期7天)
穿刺接種,液體培養(yǎng)后四區(qū)劃線,再挑單菌落液體培養(yǎng)。
4、菌落平板(冰袋運輸,存于4℃,保質(zhì)期7天)
直接挑取單菌落至液體培養(yǎng)基中。

5、液體質(zhì)粒(冰袋運輸,存于-20℃,保質(zhì)期90天)
單獨提取的液體質(zhì)粒收到后可直接使用。
6、濾紙質(zhì)粒(常溫運輸,存于-20度,90天保質(zhì)期,請務必轉(zhuǎn)化挑單克隆培養(yǎng),不要直接使用和測序)
收到貨后將濾紙畫圈部分剪下放入EP管中,加100ul無菌水將濾紙浸濕并浸泡5min,吸取5ul質(zhì)粒轉(zhuǎn)化,離心全涂。



二、轉(zhuǎn)化圖片

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